Suggerimenti intelligenti per il laboratorio che ogni specialista dovrebbe conoscere
In un ambiente di laboratorio molto frequentato, anche piccoli accorgimenti possono fare una grande differenza. Che si tratti di ottimizzare i flussi di lavoro o di risolvere risultati inaspettati, i nostri consigli di laboratorio supportati da esperti sono qui per aiutarti.
Qui di seguito abbiamo raccolto informazioni essenziali sulle sfide più comuni del laboratorio, dalla gestione dei reagenti coniugati al miglioramento dell’accuratezza dei risultati, in modo che tu possa continuare a eseguire i tuoi test senza problemi e con fiducia.
Spesso i clienti ci contattano quando improvvisamente trovano titoli elevati. La domanda principale è se i risultati sono reali o se sono stati causati da un errore tecnico. Una possibile ragione è descritta di seguito. Raccomandiamo di utilizzare una diluizione in due fasi per ottenere una diluizione 1:500 del campione di siero. Il primo passo consiste nell’aggiungere 5ul di siero a una piastra di diluizione, assicurandoti di aggiungere tutti i campioni da diluire a questa piastra. Se hai più di una piastra di diluizione, puoi anche pipettare tutti i campioni nei pozzetti assicurandoti di identificare accuratamente le posizioni con un modello di piastra BioChek. Quindi aggiungi 245ul di diluenti verdi per campioni per ottenere una diluizione iniziale di 1:50.
Il secondo passo consiste nell’aggiungere 90ul di diluente per campioni (diluente chiaro o verde a seconda del tipo di kit) alla piastra di analisi. Quindi aggiungi 10ul di siero diluito dalla piastra di diluizione alla piastra di analisi, ottenendo la diluizione finale del campione richiesta di 1:500. È di fondamentale importanza aggiungere i 90ul di diluente alla piastra di analisi prima di aggiungere i 10ul di siero diluito dalla piastra di diluizione alla piastra di analisi.
Un errore comune è quello di aggiungere prima 10ul di siero diluito e poi 90ul di diluente per campioni. Il risultato di questa azione è che per un breve periodo un campione con una diluizione 1:50 reagirà con la piastra rivestita. I titoli saranno artificialmente elevati e i risultati causeranno confusione.
Un aiuto importante per confermare che la procedura di diluizione è stata eseguita correttamente è l’uso del nostro controllo di riferimento liofilizzato RS01. Il valore di questo controllo è pubblicato sul certificato di analisi di ogni kit.
Conclusione:
Sii molto rigoroso nel seguire i protocolli di test, piccole modifiche possono causare grandi differenze nei risultati.
Alcuni clienti hanno bisogno di eseguire piastre parziali per 1 o più test. Il problema è che le piastre Microtitre rivestite di antigene sono sensibili all’esposizione all’umidità, che potrebbe rappresentare un problema durante l’esecuzione di piastre parziali. Pertanto, tutte le azioni da intraprendere durante l’esecuzione di piastre parziali sono volte a evitare che i pozzetti non utilizzati siano umidi. Poiché è impossibile evitare completamente l’esposizione all’umidità, la durata di conservazione della piastra sarà in qualche modo compromessa dall’utilizzo di piastre parziali. Si consiglia di utilizzare l’intera piastra entro 2-6 settimane dal primo utilizzo della piastra parziale.
Un altro componente che può influire sulla durata di conservazione delle piastre parziali è il coniugato. Questo perché il coniugato viene equibrillato ed esposto a temperatura ambiente più frequentemente rispetto a quando si utilizzano piastre complete. La soluzione consiste nel misurare la quantità di coniugato necessaria subito dopo aver tolto il kit dal frigorifero. Dopo aver misurato la quantità corretta di coniugato, rimetti il contenitore in frigorifero per evitare che tutto il coniugato arrivi a temperatura ambiente.
Controlli positivi e negativi
Il kit contiene un volume sufficiente di controlli positivi e negativi per consentire un massimo di 15 analisi.
Trattamento della piastra per microtitolazione rivestita:
BioChek ha ora a disposizione un kit di piastre parziali che contiene tutte le istruzioni e i materiali necessari (sigillatori per piastre, buste sigillate per la conservazione, buste essiccanti) per la gestione e la conservazione di piastre parziali. L’uso corretto del kit BC PP previene il decadimento delle piastre con antigene rivestito, prolungando la durata di conservazione delle piastre parzialmente utilizzate da 2 a 6 settimane dopo il primo utilizzo.
BioChek realizza dei ring trial per valutare se i laboratori dei suoi clienti producono risultati accurati. L’anno scorso, a 23 laboratori sono stati inviati campioni con livelli di anticorpi noti. Tuttavia, non conoscevano il risultato atteso. 17 di questi laboratori hanno ottenuto buoni risultati e i restanti sei che non li hanno ottenuti sono stati consigliati da BioChek su come migliorare la loro accuratezza. Inutile dire che hanno ottenuto buoni risultati dopo aver ricevuto questi consigli.
A ogni laboratorio è stato inviato un set di 12 sieri liofilizzati, otto dei quali identici per valutare la ripetibilità.
Tra coloro che non hanno ottenuto buoni risultati al primo tentativo, BioChek ha individuato il problema per migliorare i risultati.
Un laboratorio ha ottenuto titoli elevati su tutti i campioni e BioChek ha suggerito di rivedere il metodo di diluizione. Tre laboratori hanno ottenuto un CV elevato, il che suggerisce l’esistenza di incoerenze nelle loro tecniche. Infine, tre laboratori hanno mostrato che alcuni campioni erano accurati e altri no. BioChek ha suggerito loro di ricontrollare le attrezzature, per assicurarsi che siano calibrate, o di utilizzare nuove pipette.
Tutti i laboratori, dopo aver ottenuto buoni risultati, hanno ricevuto certificati per verificare la loro conformità.
Il software BioChek memorizza i risultati e le informazioni sul gregge in un database online, consentendo agli utenti di
gestire in modo efficace i risultati di ELISA e PCR. È disponibile una serie di report per gestire e
analizzare dati come:
