Conseils de laboratoire intelligents que tout spécialiste devrait connaître
Dans un environnement de laboratoire très actif, même de petites modifications peuvent faire une grande différence. Qu’il s’agisse d’optimiser les flux de travail ou de dépanner des résultats inattendus, nos conseils de laboratoire appuyés par des experts sont là pour vous aider.
Nous avons rassemblé ci-dessous des informations essentielles sur les défis de laboratoire les plus courants – de la manipulation des réactifs conjugués à l’amélioration de la précision des résultats – afin que vous puissiez continuer à réaliser vos essais en douceur et en toute confiance.
Les clients nous contactent souvent lorsqu’ils découvrent soudainement des titres élevés. La grande question est de savoir si ces résultats sont réels ou s’ils sont dus à une erreur technique. Une raison possible est décrite ci-dessous. Nous recommandons d’utiliser une dilution en deux étapes pour diluer un échantillon de sérum au 1:500. La première étape consiste à ajouter 5 ul de sérum à une plaque de dilution en veillant à ajouter tous les échantillons à diluer à cette plaque. Si vous avez plus d’une plaque de dilution, vous pouvez également pipeter tous les échantillons dans les puits en veillant à identifier soigneusement les positions à l’aide d’un gabarit de plaque BioChek. Ajoutez ensuite 245 ml de diluants d’échantillons verts pour obtenir une dilution initiale de 1:50.
La deuxième étape consiste à ajouter 90 ul de diluant d’échantillon (diluant clair ou vert selon le type de kit) à la plaque de test. Ajoutez ensuite 10 µl de sérum dilué provenant de la plaque de dilution à la plaque de test pour obtenir la dilution finale de l’échantillon requise de 1:500. Il est essentiel d’ajouter les 90ul de diluant à la plaque de test avant d’ajouter les 10ul de sérum dilué de la plaque de dilution à la plaque de test.
Une erreur fréquente consiste à ajouter d’abord 10 ul de sérum dilué, puis 90 ul de diluant d’échantillon. Le résultat de cette action est que, pendant une courte période, un échantillon dilué à 1:50 réagira avec la plaque enduite. Les titres sont alors artificiellement élevés et les résultats prêtent à confusion.
L’utilisation de notre contrôle de référence lyophilisé RS01 est une aide importante pour confirmer que la procédure de dilution a été effectuée correctement. La valeur de ce contrôle est publiée sur le certificat d’analyse de chaque kit.
Conclusion :
Respectez scrupuleusement les protocoles d’essai, car des changements mineurs peuvent entraîner de grandes différences dans les résultats.
Certains clients ont besoin d’utiliser des plaques partielles pour un ou plusieurs tests. Le problème est que les plaques Microtitre recouvertes d’antigène sont sensibles à l’humidité, ce qui peut poser un problème lors de l’utilisation de plaques partielles. Par conséquent, toutes les mesures prises lors de l’utilisation de plaques partielles visent à éviter d’humidifier les puits inutilisés. Comme il est impossible d’éviter complètement l’exposition à l’humidité, la durée de conservation de la plaque sera réduite dans une certaine mesure lors de l’utilisation de plaques partielles. Nous recommandons d’utiliser la plaque entière dans les 2 à 6 semaines suivant la première utilisation de la plaque partielle.
Le conjugué est un autre composant susceptible d’affecter la durée de conservation lors de l’utilisation de plaques partielles. En effet, le conjugué sera équilibré et exposé à la température ambiante plus fréquemment que lors de l’utilisation de plaques complètes. La solution consiste à mesurer la quantité requise de conjugué dès que vous sortez le kit du réfrigérateur. Après avoir mesuré la quantité correcte de conjugué, remettez le récipient au réfrigérateur afin d’éviter que tout le conjugué ne soit exposé à la température ambiante.
Contrôles positifs et négatifs
Le kit contient un volume suffisant de contrôle positif et négatif pour permettre un maximum de 15 essais.
Traitement de la plaque de microtitration enduite :
BioChek propose désormais un kit de plaques partielles contenant toutes les instructions et le matériel nécessaires (scelleurs de plaques, sachets de stockage scellables, sachets déshydratants) pour l’exécution et le stockage de plaques de test partielles. L’utilisation correcte du kit BC PP permet d’éviter la dégradation des plaques d’antigène enrobées et de prolonger la durée de conservation des plaques de test partiellement utilisées de 2 à 6 semaines après la première utilisation.
BioChek met en œuvre des essais circulaires pour évaluer si les laboratoires de ses clients produisent des résultats exacts. L’année dernière, 23 laboratoires ont reçu des échantillons de niveaux d’anticorps connus. Cependant, ils ne connaissaient pas le résultat attendu. 17 de ces laboratoires ont obtenu de bons résultats et les six autres qui n’ont pas réussi ont été conseillés par BioChek sur la manière d’améliorer leur précision. Il va sans dire qu’ils ont obtenu de bons résultats suite à ces conseils.
Chaque laboratoire a reçu un ensemble de 12 sérums lyophilisés, dont huit étaient identiques afin d’évaluer la répétabilité.
Parmi ceux qui n’ont pas obtenu de bons résultats du premier coup, le problème a été identifié par BioChek afin d’améliorer leurs résultats.
Un laboratoire a obtenu des titres élevés sur tous les échantillons et BioChek lui a suggéré de revoir sa méthode de dilution. Trois laboratoires ont obtenu un CV élevé, ce qui suggère des incohérences dans leurs techniques. Enfin, trois laboratoires ont montré que certains échantillons étaient exacts et d’autres non. BioChek leur a suggéré de tester à nouveau leur équipement pour s’assurer qu’il était calibré, ou d’utiliser de nouvelles pipettes.
Tous les laboratoires qui ont obtenu de bons résultats ont reçu un certificat attestant de leur conformité.
Le logiciel BioChek stocke les résultats et les informations sur les troupeaux dans une base de données en ligne, ce qui permet aux utilisateurs de
gérer efficacement les résultats des tests ELISA et PCR. Une variété de rapports est disponible pour gérer et
analyser des données telles que
